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在抗体免疫的精密舞台上,B细胞不仅是生产抗体的“超级工厂”,更是高度特化的“免疫士兵”。而决定这群士兵是成为“短程突击队”还是“长效守卫军”的关键,就在于其接收到的极化信号。
无论是研究疫苗免疫、过敏机制,还是开发靶向B细胞的疗法,精准掌控人B细胞的体外极化,都是揭开体液免疫核心奥秘的必备技能。
第一部分:理论基石——B细胞的多元命运
1.B细胞极化是什么?
B细胞极化指的是初始B细胞在抗原和特定信号(尤其是细胞因子)的驱动下,分化为不同功能效应亚群的过程。这不仅是简单的激活增殖,更是决定抗体类别、免疫记忆和组织定位的功能性分化。
2.为什么要进行体外B细胞极化?
机制研究: 揭示特定细胞因子或通路在抗体类别转换、浆细胞分化中的作用。
疾病建模: 体外生成特定亚型的B细胞或抗体,用于研究过敏、自身免疫病或免疫缺陷。
抗体生产: 定向诱导高效浆细胞,用于单克隆抗体或高效价多克隆抗体的开发。
第二部分:核心武器库——决定B细胞命运的「因子矩阵」
B细胞的极化强烈依赖于T细胞来源的细胞因子和共刺激信号。以下是人B细胞极化的核心因子组合:
IL-4诱导的IgE/IgG1应答
核心作用:驱动抗体向IgE和IgG1类别转换
信号通路:通过激活STAT6调控ε和γ1启动子
实验方案:在CD40L或抗IgM激活基础上,添加10-20 ng/mL重组人IL-4
IFN-γ诱导的IgG1/IgG3应答
核心作用:促进IgG1和IgG3类别转换
信号通路:通过STAT1激活γ1和γ3启动子
实验方案:在CD40激活系统中加入10-50 ng/mL重组人IFN-γ
TGF-β诱导的IgA应答
核心作用:主导IgA类别转换
信号通路:通过Smad信号激活α启动子
实验方案:在CD40L激活条件下,使用2-5 ng/mL TGF-β与IL-4/IL-5协同作用
IL-21调控的生发中心反应
核心作用:促进浆细胞分化和抗体成熟
信号通路:通过STAT3介导分化过程
实验方案:在CD40激活系统中加入50-100 ng/mL重组人IL-21
第三部分:实战操作篇——人B细胞极化方案
将PBMC根据需求加到24孔/48孔/6孔细胞培养板或培养皿中,细胞密度调整为5e4-2e5/ml, 细胞培养基用RPMI-1640加10%灭活人血清,55 μM β-巯基乙醇,100ng/ml IL-2, 100ng/ml IL-10, 100ng/ml IL-21及饲养层细胞;
5天后观察并收集细胞上流式分析或其他应用。
阴性对照为PBMC 用RPMI-1640,55 μM β-巯基乙醇加10%灭活人血清培养5天

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