Treg极化太难控？优爱生物助你成为免疫总工程师

在免疫系统这个精妙的国度里，不仅需要Th1这样的“进攻军团”、Tfh这样的“协作教官”，更需要一支强大的“维和部队”，来防止免疫反应过度亢进，误伤自身。这支队伍的核心，就是调节性T细胞（Treg）。无论是探索自身免疫疾病的治愈方案、提升器官移植成功率，还是管理炎症性疾病的进程，成功诱导Treg分化、扩增其“维稳”力量，都成为了免疫疗法的前沿焦点。

 

面对Treg脆弱的极化条件和复杂的表型鉴定，您是否也觉得难以把握？别担心，这篇「Treg极化完全指南」将化身为您的实验手册，带您从原理到实践，精准培养出功能强大的“免疫和平卫士”！

 

第一部分：理论基石——认识体内的「维稳专家」

 

1.Treg细胞是什么？

 

Treg是CD4+ T细胞中一个专职负责免疫耐受与抑制免疫反应的关键亚群。它们是免疫系统的“刹车系统”，核心使命是防止自身免疫、抑制过度炎症，维持免疫内环境的稳定。

 

核心标志：

 

大师转录因子：Foxp3 —— 是Treg细胞身份和功能的“决定者”。

 

表面标志： 高表达CD25（IL-2受体α链）、CTLA-4等。

 

功能： 通过多种机制抑制效应T细胞和APC的活性，从而“平息战火”。

 

2.为什么要进行体外Treg极化？

 

机制研究： 揭示特定分子如何影响Treg的发育、稳定性和功能。

 

细胞治疗： 体外大量扩增功能性Treg，用于治疗移植物抗宿主病（GVHD）、1型糖尿病等自身免疫病，这是一种极具前景的“活细胞药”。

 

疾病模型： 获取Treg以研究其在特定疾病环境中的功能状态。

 

第二部分：核心武器库——打造「维和部队」的指令集

 

与Th1和Th17的促炎环境相反，Treg的极化需要一个耐受性微环境。

 

信号通路：

 

TCR信号：通过抗CD3/CD28抗体提供必要的初始激活信号。强度适中的TCR信号有利于Treg分化。

 

细胞因子环境：TGF-β/ Smad 通路： 中等至高水平浓度的TGF-β是诱导初始T细胞表达Foxp3，从而分化为诱导性Treg（iTreg）的最关键细胞因子，没有之一！ 它开启了Treg的发育程序。

 

IL-2/ STAT5通路： Treg本身不产生IL-2，但其生存和增殖高度依赖外源性IL-2。充足的IL-2信号对于Treg在体外的稳定扩增和功能维持至关重要。

 

强化与稳定信号：

 

视黄酸： 由树突状细胞产生，在体外添加可显著增强TGF-β的诱导效果，并促进Treg表达肠道归巢受体，增强其抑制功能。

 

雷帕霉素（mTOR抑制剂）： 在培养体系中加入低剂量的雷帕霉素，可以选择性抑制效应T细胞的扩张，从而“富集”对mTOR信号不敏感的Treg，获得更纯的群体。

 

第三部分：实战操作篇——小鼠Treg极化方案

 

1、细胞培养

用10 µg/ml anti-mouse CD3ε mAb和2 µg/ml anti-mouse CD28 mAb包被48孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入CD4 Nanobeads（ S0K0003 ）分选后的CD4+ T细胞，培养基用RPMI-1640 加10 μg/mL anti-IFN-γ, 10 μg/mL anti-IL-4, 1ng/mL IL-2, 30 ng/mL TGF-β1, 55 μM β-巯基乙醇及10 % FBS培养;

 

48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加CD3,CD28抗体刺激），培养5天后收集细胞细胞，将胞密度控制为10⁶/ml，用10ng/ml PMA,1μg/ml Ionomycin,10μg/ml Brefeldin A共处理5h。

 

阴性对照组Th0细胞：用10 µg/ml anti-mouse CD3ε mAb和2 µg/ml anti-mouse CD28 mAb包被48孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入分选后的CD4+ T细胞，维持培养基为RPMI-1640 加 10 % FBS, 55 μM β巯基乙醇，10μg/mL anti-mouse IFNγ，10μg/mL anti-mouse IL-4 培养，48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液（不用添加 anti-mouse CD3ε和anti-mouse CD28 mAb）培养5天。

2、流式检测

收集细胞后用流式检测抗体染色上机

Biolegend 118904 PE anti-mouse FOXP3 Recombinant Antibody

 

Biolegend 102024 Alexa Fluor® 700 anti-mouse CD25 Antibody

 

 

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