Tfh极化难题？优爱生物有一本Tfh极化秘籍

在抗体免疫的精密舞台上，滤泡辅助性T细胞（Tfh）无疑是B细胞最佳的“舞伴”与“教练”。无论是生发中心反应、抗体类别转换，还是高亲和力抗体的产生，都离不开Tfh细胞的核心调控。研究疫苗免疫、自身抗体相关疾病或淋巴瘤，成功在体外诱导Tfh细胞分化已成为解锁体液免疫奥秘的关键钥匙。

面对复杂的细胞因子组合和独特的共刺激信号，您是否也曾一筹莫展？请放心，这篇“Tfh极化秘籍”将化繁为简，为您层层剖析，带您从理论到实践，全面攻克人与小鼠Tfh极化的技术堡垒！

 

第一部分：理论基石——Tfh细胞的独特使命

 

1.Tfh细胞是什么？

Tfh细胞是CD4+ T细胞的一个功能独特的亚群，其名称源于其主要定位于淋巴滤泡。它们是体液免疫的“特级教练”，核心功能是辅助B细胞。其标志性特征包括：

 

关键转录因子： Bcl-6

 

特征性表面分子： CXCR5（使其能归巢至滤泡）、PD-1、ICOS

 

核心效应细胞因子： IL-21（驱动B细胞增殖和分化），同时也能产生IL-4和IFN-γ等。

 

2.为什么要进行体外Tfh极化？

 

机制探索： 深入研究信号通路、代谢重编程或药物如何影响Tfh的分化与功能。

 

疾病建模： 获得功能性Tfh细胞，用于构建自身免疫病（如狼疮、类风湿关节炎）或免疫缺陷病模型。

 

疫苗与疗法开发： 优化疫苗佐剂策略，或为过继细胞治疗提供能够增强体液免疫的T细胞。

 

第二部分：核心武器库——Tfh极化因子详解

 

与Th1/Th2/Th17等路径相比，Tfh的分化依赖于一套更为精细和独特的信号组合。

 

“经典组合”信号通路：

 

TCR信号（第一信号）： 通过抗CD3/CD28抗体提供初始激活信号，这是所有T细胞分化的基础。

 

ICOS信号（强化共刺激）： ICOS信号是驱动Tfh分化的核心共刺激信号！ 通过激动性抗ICOS抗体提供信号，能强力诱导Bcl-6的表达，是体外极化方案中不可或缺的一环。

 

细胞因子环境（定向驱动）：

 

IL-6/STAT3通路： IL-6是诱导初始T细胞表达Bcl-6和CXCR5的早期关键因子。

 

IL-21/STAT3通路： IL-21是Tfh细胞自分泌的关键因子，能进一步强化和稳定Tfh细胞表型，形成正反馈循环。在极化体系中，外源性添加IL-21效果显著。

 

TGF-β与IL-12： 在某些情境下，低浓度的TGF-β与IL-12或IL-6的组合，也被证明能协同促进Tfh样细胞的分化。

 

第三部分：实战操作篇——人与小鼠Tfh极化方案

 

A.人Tfh极化方案

 

1.细胞培养

用5 µg/ml CD3 抗体包被96孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入用CD4 Nanobeads, human（S0B5740）分选后的CD4+ T细胞，培养基用RPMI-1640 加100 ng/ml IL-6, 50 ng/ml IL-21, 10 μg/ml anti-IFN-γ, 10 μg/ml anti-IL-4抗体10 ng/mL TGF-β, 55 μM β-巯基乙醇，1 µg/ml CD28抗体及10 % FBS培养;

 

48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加CD3,CD28抗体刺激）;

 

培养5天后收集细胞细胞，将胞密度控制为10⁶/ml，用10ng/ml PMA+1μg/ml Ionomycin ，10μg/ml Brefeldin A共处理5h。

阴性对照组Th0细胞: 用5 µg/ml anti-human CD3 mAb包被96孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入分选后的CD4+ T细胞, 培养基用RPMI-1640 加 10 % FBS, 55 μM β巯基乙醇, 10μg/mL Anti-human IL-4, 10μg/mL Anti-Human IFN-γ, 200U/ml IL-2 , 1 µg/ml anti-human CD28 mAb培养;

 

48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加CD3,CD28抗体刺激）培养5天。

2.流式检测

收集细胞后用流式检测抗体染色上机

抗体货号 starter S0B5348 Alexa Fluor® 647 Mouse Anti-Human CD279 (PD-1) Antibody

 

 

 

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B. 小鼠Tfh极化方案

 

1.细胞培养

用10 µg/ml anti-mouse CD3ε mAb和2 µg/ml anti-mouse CD28 mAb包被48孔细胞培养板过夜;

 

第二天洗板封闭后加入分选后的CD4+ T细胞，培养基用RPMI-1640 加100 ng/ml IL-6, 50 ng/ml IL-21, 30 ng/mL TGF-β1, 10 μg/ml anti-IL-2, 10 μg/ml anti-IFN-γ,10 μg/ml anti-IL-4, 55 μM β-巯基乙醇及10 % FBS培养, 48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加 anti-mouse CD3ε和anti-mouse CD28 mAb刺激）;

 

培养5天后收集细胞细胞，将胞密度控制为10⁶/ml，用10ng/ml PMA,1μg/ml Ionomycin，10μg/ml Brefeldin A共处理5h。

 

阴性对照组Th0细胞：用10 µg/ml anti-mouse CD3ε mAb和2 µg/ml anti-mouse CD28 mAb包被48孔细胞培养板过夜;

 

第二天洗板封闭后加入分选后的CD4+ T细胞，维持培养基为RPMI-1640 加 10 % FBS, 55 μM β巯基乙醇，10μg/mL anti-mouse IFNγ，10μg/mL anti-mouse IL-4 培养，48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液（不用添加 anti-mouse CD3ε和anti-mouse CD28 mAb）培养5天。

2.流式检测

收集细胞后用流式检测抗体染色上机

S0B5654 starter APC Rat Anti-Mouse PD-1 Antibody

 

 

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