UA-Glo® Dual Luciferase Assay System

R1 试剂灌装于10 ml 或100 ml 的棕色瓶中，R2包括R2缓冲液及R2底物，R2缓冲液灌装于10 ml 或100 ml 的棕色瓶中，R2底物分装于2ml螺旋管中，具体规格如下：

1.在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞，转染合适质粒或带有相关双荧光素酶表达载体的稳定细胞株。建议使用白板。
2.根据项目需求对细胞进行相关处理，并继续培养合适的时间。
3.取出检测缓冲液及底物，在室温平衡20分钟。
4.取出待测细胞培养板，在室温平衡20分钟。
5.准备检测试剂，R1试剂可以直接使用。R2底物为100x 浓缩液，使用前用R2缓冲液配成R2 1x 工作液。注意避光。
6.加50 µl 的 R1 试剂到 100 µl 96 孔板细胞中, 或10 µl 试剂到20 µl 384 孔板细胞中，轻轻振荡2分钟，放置暗处继续裂解5～8分钟。
7.在luminescence 读板仪上读取荧光信号。此为萤火虫荧光素酶活性读数。保存数据。
8.向上述反应板孔中加入50µl R2 1x 工作液，轻轻振荡半分钟。
9.在luminescence 读板仪上读取荧光信号。此为海肾荧光素酶活性读数。保存数据。
10.进行数据处理分析。
11.未使用完的试剂建议-20℃保存。

1.温度：荧光酶检测除特别注明之外，都是在室温（22-25C）下进行的。温度对酶反应影响较大。

2.试剂量：非经严格验证，不建议随意改变反应试剂用量。

3.读板时间：请按说明书推荐时间进行读板，建议在10-30分钟内完成读板以获得最佳结果。

4.板间内参：如果需要进行板间数据比较，建议在所有反应板均设立两孔未加化合物的阳性对照作为板间内参，用板间内参读数对每块板读数先进行纠正（normalization），纠正后的数据再进行下游处理分析。

5.反应板：荧光读数高低可能对临近周围孔读数形成明显干扰，主要是荧光信号外溢。需要时可以使用不透明底的白板或黑板进行实验或验证。

6.试剂混合：不同批次的试剂，已经启用但未使用完而储存试剂及条件差别比较明显的试剂，不建议混合后使用。

7.分装储存：按照说明书分装储存反应试剂，保证试剂的稳定性。