2小时检测病毒滴度-昆虫杆状病毒滴度检测试剂盒上线！

 

昆虫- 杆状病毒表达系统

杆状病毒是一种特异性感染节肢动物的双链环状DNA病毒，包括核多角体和颗粒状病毒属。

目前主要用于重组蛋白表达的是苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNP)和家蚕核多角体病毒(BmNPV)。

常用的昆虫细胞系有sf9、sf21、High-Five等。其中Sf9对细胞渗透压、剪切力和pH的耐受性比sf21强，在转染和扩增杆状病毒上更有优势。High-Five细胞比sf9细胞增殖时间更短，表达量更高，其表达的蛋白在糖基化修饰方面比sf9更复杂。

昆虫细胞-杆状病毒表达系统特点：

1.蛋白表达能力强，常采用多角体蛋白或P10启动子，有报道，昆虫细胞表达系统可使重组蛋白的量达到细胞总蛋白的50%；

2.基因容量大，可插入(100kb)的外源基因；

3.能容纳多个外源基因，多个基因共表达；

4.安全性大，病毒的天然宿主是昆虫，不能在哺乳动物细胞内复制增殖。

 

杆状病毒滴度检测

为什么需要检测病毒滴度？

1.确认病毒滴度，保证包装成功；

病毒扩增过程中，高MOI(病毒颗粒数与细胞总数的比值)感染细胞，会产生缺陷病毒。

2.确保实验的一致性；

3.确认MOI，保证重组蛋白表达效率：

重组蛋白生产过程中，MOI通常要求达到1-5左右，以保证细胞能同时感染病毒，保持相似和可重复的生产动力学。

什么阶段需要检测病毒滴度？

1.病毒扩增过程中；

2.病毒感染细胞进行重组蛋白生产过程中；

有什么方法可以检测病毒滴度？

目前常用的病毒滴度检测方法包括空斑实验、流式检测、TCID50、LD50、EID50、实时定量PCR、免疫荧光斑块实验、免疫印迹法、免疫沉淀、ELISA等方法。不同方法对比如下：

 

 

以上表格可以看到，qPCR是重复性好、耗时短，工作量不高的检测方法，并且目前qPCR技术已经成为实验室常用技术之一，成本也有较大下降。

 

空斑形成实验

原理：病毒与细胞共培养时，病毒会坏细胞形成空斑。在病毒10倍梯度稀释及标准条件下，一个空斑相当于一个病毒，以此判断病毒滴度。

计算方式：病毒滴度(Pfu/ml)=1/稀释倍数X噬菌斑数X1/每孔接种体积

特点：

1.经典的检测病毒滴度方式，使用广泛；

2.耗费时间较长，根据病毒不同需要4-10天；

3.待感染细胞需要处于对数生长期且活力大于90%；

4.不适用于不易形成空斑的病毒；

5.重复性差。

 

流式检测

原理：将生长状况良好的细胞感染梯度稀释检测病毒，采用带FITC、APC、PE标签的抗体标记细胞，处理后经流式检测判断感染病毒细胞数量，以此确认病毒滴度。

计算方式：

 

 

特点：

1.检测时间相对短；

2.结合仪器分析，结果更加客观；

3.操作复杂，需要结合细胞实验。

 

实时定量PCR

原理：实时定量PCR的原理是DNA复制。DNA复制过程中，仪器实时检测荧光信号的变化得到信号曲线，计算出Ct值与病毒滴度的标准曲线，以此检测病毒滴度。

根据研究表明，qPCR方法与空斑法结果一致。

 

 

特点：

1.灵敏度高；

2.重复性好；

3.操作简单快捷；

4.不需要感染细胞、病毒稀释等操作；

5.通量更高。

 

优爱杆状病毒检测试剂盒上线！

优爱结合现有技术，在昆虫-杆状病毒表达系统基础上推出杆状病毒滴度检测试剂盒。

针对gp64基因设计引物，仅需2-3个小时即可检测病毒滴度，方便快速进行下游细胞感染等步骤。避免病毒的反复冻存，保证病毒活力。

没有细胞感染和病毒滴度操作的步骤，操作快速便捷。

无需病毒DNA纯化，更节省时间。

货号：UA070018

名称：Baculovirus Quantitative Titration Kit

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适配仪器：

ABI Prism7500/7500 Fast

QuantStudio 3 System

QuantStudio 5 System

QuantStudio 6 Flex System

OuantStudio 7 Flex System

OuantStudio 12k Flex System

ViiA 7 System

Stratagene Mx3000P/Mx3005P/Mx4000

Corbett Rotor Gene 3000等