免疫研究的福音！优爱生物Th17极化套装，让极化实验变得So Easy!

在免疫系统的精密布局中，辅助性T细胞17（Th17）作为CD4+T细胞的重要亚群，扮演着抵御细胞外细菌和真菌感染的关键角色，同时也是自身免疫疾病的强力推动者。无论是研究黏膜免疫、感染防御，还是探索自身免疫病的发病机制，掌握体外Th17细胞极化技术都成为不可或缺的核心技能！

 

面对复杂的细胞因子组合和精细的调控网络，你是否对Th17极化感到无从下手？放心，这篇"Th17极化完全指南"将为你揭开所有谜团，带你从基础到精通，全面掌握人与小鼠Th17极化的精髓！

 

第一部分：理论基石——Th17细胞的双面特性

 

1.Th17细胞是什么？

Th17细胞是近年来备受关注的CD4+T细胞功能亚群，其特征性分泌IL-17A、IL-17F、IL-22等细胞因子。它们是黏膜免疫的"守护者"，通过招募中性粒细胞和维持上皮屏障完整性，构筑起抵御真菌和细胞外细菌感染的第一道防线。然而，当调控失常时，它们又会转化为"炎症风暴的引爆者"，驱动多种自身免疫性疾病的发生发展。

 

2.为什么要进行体外Th17极化？

 

机制探索：解析TGF-β、IL-6等关键因子在Th17分化中的协同作用机制

 

疾病研究：获取Th17细胞用于研究银屑病、多发性硬化、类风湿关节炎等自身免疫病

 

药物筛选：建立Th17相关疾病模型，筛选靶向Th17通路的新型治疗药物

 

免疫平衡：研究Th17/Treg平衡在免疫稳态中的调控作用

 

第二部分：核心武器库——极化因子全解析

 

Th17分化的调控网络相对复杂，其极化条件需要精确的细胞因子组合和适当的抑制剂使用。

 

"经典三要素"信号通路：

Ø TCR激活信号：通过抗CD3/CD28抗体提供T细胞活化的基础信号
Ø TGF-β+IL-6协同启动：TGF-β与IL-6的组合是启动Th17分化的核心驱动力，诱导关键转录因子RORγt表达
Ø 细胞因子强化网络：IL-1β和IL-23可进一步促进Th17细胞的增殖和功能稳定

 

精准调控策略：

Ø 抗体阻断方案：使用抗IFN-γ和抗IL-4抗体，有效消除Th1和Th2分化的竞争干扰
Ø 信号通路调节：通过适当抑制STAT1/STAT4/STAT5信号，为Th17分化创造有利环境

这套经过优化的极化体系能够高效诱导初始CD4+T细胞分化为功能成熟的Th17细胞，其典型特征包括大量分泌IL-17A、高表达RORγt和CCR6等表面分子，为深入研究Th17生物学功能提供理想的实验平台。

 

第三部分：实战操作篇——小鼠与人Th17极化方案

 

小鼠Th17极化方案

 

1.细胞培养

用10 µg/ml anti-mouse CD3ε mAb和2 µg/ml anti-mouse CD28 mAb包被48孔细胞培养板过夜;

 

第二天洗板封闭后加入分选后的CD4+ T细胞，培养基用RPMI-1640 加10 μg/mL anti-IFN-γ,10 μg/mL anti-IL-2, 10 μg/mL anti-IL-4, 50 ng/mL IL-6, 30 ng/mL TGF-β1, 10 ng/mL IL-23 , 50 ng/mLIL-1β, 55 μM β-巯基乙醇及10 % FBS培养;

 

48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加CD3,CD28抗体刺激）;

 

培养5天后收集细胞细胞，将胞密度控制为10⁶/ml，用10ng/ml PMA,1μg/ml Ionomycin,10μg/ml Brefeldin A共处理5h。

阴性对照组Th0细胞：用10 µg/ml anti-mouse CD3ε mAb和2 µg/ml anti-mouse CD28 mAb包被48孔细胞培养板过夜;

 

第二天洗板封闭后加入分选后的CD4+ T细胞，维持培养基为RPMI-1640 加 10 % FBS, 55 μM β巯基乙醇，10μg/mL anti-mouse IFNγ，10μg/mL anti-mouse IL-4 培养;

 

48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液（不用添加 anti-mouse CD3ε和anti-mouse CD28 mAb）培养5天。

 

2、流式检测

收集细胞后用流式检测抗体染色上机

BD Mouse IL-17A PE (clone: TC11-18H10.1)

 

Th17 Polarization Kit, Mouse/小鼠Th17极化套装_UA090020_优爱(UA BIOSCIENCE)官网

 

 

B. 人Th17极化方案

 

1、细胞培养

用5 µg/ml CD3 抗体包被96孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入用CD4 Nanobeads, human（S0B5740）分选后的CD4+ T细胞，培养基用RPMI-1640 加10 μg/mL IFN-γ抗体，10 μg/mL IL-4 抗体，30 ng/mL human IL-6, 10 ng/mL TGF-β1,20 ng/mL IL-23 ,20 ng/mL IL-1β, 55 μM β-巯基乙醇，1 µg/ml CD28抗体及10 % FBS培养;

 

48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加CD3,CD28抗体刺激）;

 

培养5天后收集细胞细胞，将胞密度控制为10⁶/ml，用10ng/ml PMA+1μg/ml lonomucin，10μg/ml Brefeldin A共处理5h。

 

阴性对照组Th0细胞: 用5 µg/ml anti-human CD3 mAb包被96孔细胞培养板过夜;

 

第二天洗板封闭后加入分选后的CD4+ T细胞, 培养基用RPMI-1640 加 10 % FBS, 55 μM β巯基乙醇, 10μg/mL Anti-human IL-4, 10μg/mL Anti-Human IFN-γ, 200U/ml IL-2 , 1 µg/ml anti-human CD28 mAb培养;

48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加CD3,CD28抗体刺激）培养5天。

2、流式检测

收集细胞后用流式检测抗体染色上机

抗体货号 Thermo 25-7179-42 IL-17A Monoclonal Antibody (eBio64DEC17), PE-Cyanine7

 

Th17 Polarization Kit, Human /人Th17极化套装_UA090019_优爱(UA BIOSCIENCE)官网